Ablキナーゼの基質タンパク質Abltide-GSTの
Ablキナーゼによる in vitro kinase assayです
リン酸基供与体として，ATPあるいは，ATP-γSを用いています。
ATP-γSは，ATPアナログとして，キナーゼアッセイに用いられます。
基質は，チオリン酸化体となります。
チオリン酸基を検出する優れた方法(WB)があり，非RIの観点からも汎用されます。
しかし，ATP-γSはATPの代替として，本当に同等であるかは検討されていませんでした。
Abl kinase assayにおいて，Abl による両者の利用効率を比較しました。
Mn2+–, Zn2+– どちらのPhos-tag SDS-PAGEでも，
リン酸基と同様に，チオリン酸基も分離・検出可能です。
しかし，それぞれとの親和性に違いがあり，シフトアップの度合いは異なります。
ATP-γSを用いた場合，ATPを用いた場合よりも，
シフトアップするバンドの濃度が薄く，リン酸化の効率が悪いと言えます。
用いた基質がどれだけリン酸化，あるいはチオリン酸化したかを
定量してその割合をグラフにすると次のようになります。
関連画像
阻害剤GlivecのAblキナーゼ阻害プロファイル
Abl/Abltide-GST kinase assay
Abl/Abltide-GST phosphatase assay